Detaljeret forklaring af reagens flygtige i PCR -eksperimenter

Detaljeret forklaring af reagensflygtige i PCR -eksperimenter.

I PCR -eksperimentet dækker vi omhyggeligt låget efter tilsætning af reaktionssystemet og bekræfter gentagne gange, at låget er lukket for at undgå reagens flygtige. Men nogle gange er vi også i tvivl: Vi har bekræftet, at låget er tæt lukket, men efter at eksperimentet er afsluttet, vil reagenset stadig fordampe. hvad er grunden?

Faktisk er reagensflygtige volatilisering et af de mest almindelige problemer i PCR -eksperimenter, og der er mange faktorer, der påvirker reagens flygtige.

Fordampning refererer til det under PCR -eksperimentet fordamper reaktionsopløsningen ved høj temperatur og kondenserer derefter på flaskevæggen eller topdækslet for at danne vandtåge eller vanddråber eller strømme direkte fra luftgabet på flaskehætten eller filmen, hvilket resulterer i i en ændring i koncentrationen af ​​reaktionsopløsningen. Ændringer, mængden af ​​reaktionsopløsning faldt, og nogle fordampede endda til tørhed, hvilket resulterede i ugyldige eksperimenter.

1. varmt lågtryk, temperatur

I PCR -eksperimenter opvarmer vi normalt låget for at forhindre kondensation af reagensdamp. Temperaturen på det opvarmede låg er normalt højere end reaktionsopløsningen for at forhindre kondensation af dampe.

Termisk cykleropvarmningslåg kan groft opdeles i de følgende fire typer: ikke-justerbare opvarmningslåg, justerbare opvarmningslåg, adaptive opvarmningslåg og automatiske opvarmningslåg. Justerbar opvarmet låg har fingertæt komprimering. Hvis det ikke strammes tæt, fordamper reagenser. Kantfordampning kan minimeres ved at øge trykket på det opvarmede låg. Nogle gange kan oversigtsmæssig klemme røret og dreje drejeknappen. Under normale omstændigheder kan det elektriske smarte opvarmningsdæksel automatisk påvise forbrugsstoffer i forskellige højder, automatisk komprimere forbrugsstoffer og trykket er ensartet og konstant, hvilket reducerer reagensfordampning og manuelle fejl og forbedrer eksperimentel nøjagtighed og gentagelighed.

2. Deformation af forbrugsstoffer

Til damplækager tror de fleste mennesker, at det varme lågtryk ikke er nok. Presset på det varme låg er meget vigtigt, men det er kun et aspekt. Faktisk er forbrugsstoffer også meget vigtige.

PCR -åbningsplader er normalt lavet af plastmaterialer, der udvides og deformerer meget efter at være blevet opvarmet. Den termiske ekspansionshastighed for PCR -metalbasen, der bruges til at placere PCR -åbningspladen, er ekstremt lav, og PCR -åbningspladen kan ikke ekspanderes normalt langs planet efter termisk ekspansion. Den svulmende tilstand gør det øverste varmedæksel ude af stand til fuldt ud at kontakte overfladen af ​​PCR -åbningspladen, hvilket resulterer i ujævn temperatur og tryk, hvilket forårsager reagensfordampning ved kanten af ​​PCR -åbningspladen og påvirker PCR -detektionseffekten.

3. Forbrugsstoffer er ikke tæt forseglet

Tætheden af ​​det termiske låg og forbrugsstoffer betyder ikke, at PCR -rørhætten er tæt lukket, og kvaliteten af ​​PCR -brøndpladen er ujævn. Forbrugsstoffer af høj kvalitet, overfladen af ​​dysen og dækslet er glat, og tætningen bag kassedækslet er godt, og det er ikke let at lække. Underordnede forbrugsstoffer har ujævne tud og radiale linjer, hvilket let kan forårsage lækage eller endda tørre ud.

Prøv derfor i PCR-eksperimenter at vælge høj kvalitet og passende forbrugsstoffer. På samme tid kan reaktionssystemet udvides for at minimere påvirkningen af ​​systemfordampning på reaktionen.