Forseglings- og forureningsproblemer i multiwell -cellekulturplader

Indlæsning og håndtering af multi-brøndcellekulturplader:

Cellekulturpladen følger også princippet om streng asepsis, når man udfører celleoperationer. Alle operationer skal være standardiserede og videnskabelige og vil ikke medføre yderligere indflydelse på cellevækst. Det mest almindelige problem er, hvordan man sikrer cellernes ensartethed efter tilsætning af prøven og minimerer virkningen af ​​at ændre mediet på cellernes væksttilstand.

Spørg:
Lågene på 96 og 24-brønds kulturplader eller petriskåle er meget løse, hvilket er praktisk til ventilation, men vil bakterier, skimmel og andre forurenende også glide ind?

svar:
Låget er meget løs, der hører til semi-åben kultur, og formålet med dette er at ventilere (faktisk er det at gøre CO2 uden for kulturskål medium).
Alt har fordele og ulemper, som naturligvis øger muligheden for forurening. Derudover får dette væsken i skålen til at fordampe, hvilket er bemærkelsesværdigt for præcis dosering af medikamenter. Derfor er de følgende to mål nødvendige: a. Luften i inkubatoren skal være ren (regelmæssig ultraviolet lys, alkoholskrubning, og inkubatoren skal åbnes og lukkes så lidt som muligt) b. Fugtigheden i inkubatoren skal altid holdes på 100% (vasken med sterilt destilleret vand placeret i inkubatoren).
Ligesom en petriskål er den også en beholder med et omvendt låg, og den vil ikke blive forurenet. Hovedsageligt på grund af det negative tryk fra den luftstrøm, der genereres af "L" -kanten af ​​dækslet, er der mikroorganismer, der er bundet til støvet, og det støv, der føres af luftstrømmen, kan ikke passere gennem kanten af ​​dækslet, der genererer undertryk. Ventilationseffekten er kun gennem diffusionen af ​​luft, og der genereres ingen luftstrøm, så den vil kun trække vejret og ikke trænge ind i bakterier.

Spørg:
Ved hjælp af en 24-brøndsplade er der operationer i nogle af brøndene (i den ultra-rene bænk), og der er celler, der skal dyrkes i andre brønde. Jeg er bekymret for, at dette vil forårsage forurening. Jeg ved ikke hvad jeg skal være opmærksom på?

svar:
Hvis operationen er standardiseret i den ultra-rene bænk, skal den være OK. Jeg tror, ​​du kan gøre fuld brug af dækket af kulturpladen, prøve at udsætte kun de huller, der skal betjenes, og dække de andre huller med dæksler.
Overvej omfattende inden brug og brug fuldt ud af alle huller; Hvis du kun behøver at bruge et par huller, kan du kun bruge den ene side og dække resten med et dæksel. Jeg er vant til at bruge det rigtige hul først (det er praktisk at tilføje prøver til højre hånd).

Når du betjener, skal du bruge et par glasglas til at hæve den ene side af brættet, åbner ikke dækslet helt, generelt ikke noget problem.
Ujævn celledistribution og løsninger

Spørg:
Celler inokuleres på kulturpladen, og cellerne samles altid i den perifere del, hvordan man håndterer det?

svar:
Må jeg spørge, hvordan dine celler blandes? Er det pipettering eller ryster kulturpladen? Hvis det er sidstnævnte, og hvis det rystes i en cirkel, er det meget sandsynligt, at cellerne bliver kastet til den perifere del på grund af centrifugalkraften, hvilket resulterer i færre celler i midten. Mere end fire uger!
Her er en god måde: Før du dyrker frøpladen, skal du lægge kulturpladen i inkubatoren i et par timers mætning og derefter tage den ud. Kraften skal være lys, når cellerne plantes. Tilføjelse af langsomt tillader cellesuspensionen at strømme ind i pladenes brønde, og de dyrkede celler vokser dybest set jævnt. Husk at aldrig ryste med en ryster, ellers klumpes sammen sammen, som du sagde.
Jo mindre huldiameteren på kulturpladen, jo mere åbenlyst er dette fænomen. Dette fænomen er uundgåeligt for 24 og 96-brøndsplader, fordi væsken klæber til væggen, så kulturopløsningen i brønden ikke danner et væskeniveau, men periferi er høj, ligesom et konkavt spejl. Når man bruger disse to slags åbningsplader, er det imidlertid ikke muligt at tilføje tilstrækkelig mængde kulturopløsning på grund af behovet for yderligere intervention, så cellerne vises "Edge Collection" sammen med kulturopløsningen. Det afhænger af, hvilke indikatorer du skal observere. Hvis det er MTT, vil immunohistokemi påvirke resultaterne på grund af cellelagning.
Når du fordøjer celler, skal du være opmærksom på pipettering jævnt for at undgå celleklumper, og mængden af ​​kulturopløsning i brønden skal være tilstrækkelig. Tilføj generelt nok kulturopløsning ved inokulering, og skift løsningen en gang, når du tilføjer intervention. Mængden af ​​kulturløsning, der er tilføjet til interventionsopløsningen, er lig med mængden af ​​kulturopløsning på inokulationstidspunktet, i dette tilfælde vil fænomenet "kantsæt" blive forbedret, så du kan lige så godt prøve det.

Spørg:
Hvad jeg gjorde var plaque -dannelseseksperimentet. Det er bedst at sprede cellerne i et ensartet lag. De fleste af hullerne er fine, når virussen er inokuleret, og nogle af dem er ikke ensartede. Der er store forskelle i cellegruppen. Jeg vil gerne spørge dig, hvilken metode du bruger, når du tilføjer celler?

svar:
Det er kritisk at pipette cellerne i en enkeltcellesuspension efter fordøjelse! Sørg for, at antallet af celler i hver brønd er konsistent, når du opdeler pladen!
Der er selvfølgelig også behandlingsfaktorer. Parallelismen mellem brøndene er også meget vigtig. For eksempel, når du tilsætter medicin, blandes medicinen efter fortynding for at sikre, at koncentrationen af ​​hver brønd er konsistent!
Når man tilsætter celler og lægemidler, skal testgruppen og kontrolgruppen endvidere tilsættes for at undgå forskellen i celletæthed og lægemiddelkoncentration forårsaget af sekvensen for tilsætning af prøver!

Spørg:
Blæsningen er allerede ensartet, men planken, 6 huller og 24 huller er altid noget ujævn og lidt koncentreret i midten. Derudover er det åbenlyst, at tællingen er gjort, og efter en dag eller to er densiteten af ​​hvert hul forskellig, hvilket vil påvirke detekteringen. Er der en god måde?

svar:
Hvis du bruger en pasteurpipette, skal du ikke suge for meget hver gang, fordi cellerne i pipetten automatisk synker, ofte er antallet af celler i de første par huller stort, og cellesuspensionen er ofte ensartet, og væsken vil Følg S-Shape-ruten.
Hvis du bruger en pipette, skal tipene behandles og fjernes for at undgå at beskadige cellerne, så hver gang væsken tages svarer til en brønd. Det er mere nøjagtigt at tilføje en-til-en-hul med spids. Men vær også opmærksom på at blande suspensionen.

For at oprette en parallel gruppe skal N være stor nok (du kan beregne den).

Ryst ikke efter plettering, da rysten får celler til at samle sig mod midten. Det er bedst at planke en gang.

Porøs cellekulturplade Yongyue Medical har altid betragtet kvalitetskontrol som virksomhedens levetid og forfulgt den kontinuerlige forbedring af virksomhedens konkurrenceevne. Virksomheden klæber altid til virksomhedens ånd af at adlyde love og forskrifter, der er streng med selvdisciplin, er mild og våger at tage ansvar som standarden i drift, opretholde og udvide markedet med fremragende kvalitet og fremragende service og opfylde det kunders behov i størst grad. . Win-win med kunder er vores udviklingsmål. Yongyue Medical! Din betroede partner. Vi er villige til at samarbejde oprigtigt med dig for at skabe en bedre fremtid.